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项目介绍

质量研究:一般检测

根据ICH Q6B《质量标准:生物技术产品以及生物制品的检测方法和可接受标准》、《中国药典》2020版三部中“人用重组DNA蛋白制品总论”及“人用重组单克隆抗体制品总论”、各国药典及指导原则等要求,对于蛋白生物制品鉴别类检测项目主要有分子量、肽图分析、等电点及Western Blotting等方法,主要用于鉴别蛋白本身的固有质量属性,属于鉴别项目。

工艺相关杂质主要指产品在生产制备过程中外源引入的工艺相关杂质诸如:二甲基硅油、泊洛沙姆、抗生素、Protein A残留等进行质量控制,用于监控产品的安全性。

产品相关杂质主要指蛋白类生物制品由于氨基酸及其连接糖链的种类不同导致其表面所带电荷分布不同,由此而形成的酸、碱性峰的生物活性、稳定性及PK可能会有所差异,因此有必要对酸、碱性峰的成因进行鉴定,以进一步确保产品的安全性和有效性。

服务项目

服务内容

  • 鉴别

    分子量(SDS-PAGE电泳法)主要用于鉴别蛋白的表观分子量,用于定性,主要采用SDS-PAGE电泳法对蛋白的还原分子量进行检测,可指定相关的质量标准。

    肽图分析:目的是在一级氨基酸序列水平上比较不同批次产品间的一致性,更多的是关注氨基酸修饰或断裂情况。首先对供试品进行变性、还原与烷基化后,然后对供试品溶液进行胰蛋白酶的酶切处理后,最后上液相进行色谱分析。

    等电点:主要利用毛细管等电聚焦法鉴别蛋白质等电点。

    Western Blotting:主要利用那个聚丙烯酰胺凝胶电泳对蛋白样品进行分离,然后转移至硝酸纤维薄膜上,之后用蛋白溶液(如5%BSA等)进行封闭处理,然后依次用一抗、二抗分别进行孵育处理,进而显示目的蛋白的位置。

  • 工艺相关杂质

    二甲基硅油、泊洛沙姆和吐温等均可通过HPLC-ELSD进行分析检测,并通过对照品外标法进行样品的杂质含量检测。

    MSX、抗生素等小分子残留可通过LC-MS/MS方式,进行残留的定量检测。

    Protein A残留可采用相关的试剂盒,利用酶标免疫反应原理,进行Protein A残留检测。

    总蛋白残留一般可根据中国药典通则0731蛋白质含量测定法进行相关检测。

  • 产品相关杂质

    酸、碱性峰质谱鉴定:分两步,首先利用HPLC馏分收集器对酸、碱性峰进行富集,并确认富集峰的正确性,然后对富集的酸、碱性峰以及主峰进行分子量和翻译后修饰的质谱鉴定, 从而推断酸、碱性峰可能存在的修饰(包括修饰种类和修饰比例)或断裂位点。

相关仪器及设备

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